Efecto de factores de crecimiento sobre la tasa de maduración de ovocitos y desarrollo embrionario in vitro de alpaca

Abstract

La escasa información existente sobre la producción in vitro de embriones de alpaca y considerando la maduración in vitro de ovocitos como una primera etapa fundamental que antecede a las demás etapas del proceso, sugiere estudiar y evaluar factores involucrados en ésta; por ello, el objetivo de la presente investigación fue evaluar el efecto de dos Factores de Crecimiento (FC): Factor de Crecimiento Epidermal (EGF) y Factor de Crecimiento Similar a la Insulina Tipo I (IGF-I) sobre la tasa de maduración de ovocitos de alpaca y evaluar la influencia de ésta sobre la tasa de desarrollo embrionario luego de la Fecundación In Vitro (FIV), además de determinar el tipo y concentración de FC con la que se obtiene la mayor cantidad de embriones. La investigación se ejecutó en el Laboratorio de Biotecnología Reproductiva de la Estación Experimental Agraria Canaán - INIA Ayacucho. Se recuperaron un total de 2369 ovocitos de 414 ovarios de alpaca provenientes del Matadero Municipal de Huancavelica, los cuales fueron transportados a 4-9°C por un máximo de 20 h en solución salina al 0,9% con gentamicina. Para la recuperación de los Complejos Cúmulo-Ovocitos (CCO) se utilizó la técnica de disección-ruptura folicular, seleccionando los ovocitos de calidad I, II y III. Los ovocitos seleccionados fueron distribuidos al azar en un medio de maduración constituido por: TCM-199, piruvato de sodio (0,011 g/ml), 17-β estradiol (22,2 mg/ml), L-glutamina (0,015 g/ml), FSH (0,5 mg/ml), LH (0,5 mg/ml), SFB (5%), gentamicina (80 mg/ml) y suplementado con FC según tratamiento. Se diseñaron cinco tratamientos: T1: 10 ng/ml de IGF-I; T2: 50 ng/ml de IGF-I; T3: 10 ng/ml de EGF; T4: 50 ng/ml de EGF y T5: sin FC. Posteriormente el 30% de ovocitos sometidos a maduración in vitro fueron removidos de cada uno de los tratamientos para ser fijados en solución de metanol y ácido acético (3:1) a 4°C por 36 h y evaluados mediante la tinción de orceína acética (2%) para determinar la maduración nuclear a un aumento de 400X. El 70% de ovocitos sometidos a maduración se fecundaron con espermatozoides recuperados de epidídimos y los presuntos cigotos fueron cultivados en medio SOF durante 7 días a 38.5ºC con CO2 (5%), O2 (5%), N2 (5%) y 90% de humedad relativa. Los resultados indican que hay diferencia significativa (P<0,05) de los FC sobre la tasa de maduración de ovocitos con la prueba de Duncan; resultando el T1 (61,81%) diferente al T5 (42,22%). Respecto a la tasa de desarrollo embrionario, también se encontró diferencia significativa (P<0,05) entre tratamientos, siendo el IGF-I a 50ng/ml (37,26%) el tratamiento que proporcionó mayores tasas de desarrollo embrionario respecto a los demás tratamientos. En conclusión, la suplementación del medio de maduración con IGF-I a 50 ng/ml favorece la producción in vitro de mayor cantidad de embriones de alpaca.