Perfil genético molecular del citocromo CYP2D6 en pacientes con tuberculosis aténdídos en el Hospital Regional de Ayacucho - 2013

Abstract

El citocromo P450 2D6 (CYP2D6), es una de las más importantes enzimas involucradas en el metabolismo de los xenobióticos en el cuerpo humano; participa en la oxidación de más del 20% de las drogas de uso clínico, se expresa de forma muy variable, dependiendo del grupo étnico. El presente trabajo de investigación se realizó en el Centro de Investigación en Biología Molecular y Bioinformática de la Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de San Cristóbal de Huamanga, durante los meses de octubre de 2013 a Junio de 2014 en la ciudad de Ayacucho - Perú. Planteándonos como objetivos: determinar el perfil genético molecular del citocromo CYP2D6 en pacientes con tuberculosis atendidos en el Hospital Regional de Ayacucho; estandarizar las técnicas de XL-PCR, PCR anidado y PCR tetraprimer; y detectar las variantes alélicas *1, *3, *4 y *6 del gen CYP2D6 de estos pacientes. La muestra estuvo conformada por 20 pacientes con tuberculosis atendidos en el Hospital Regional de Ayacucho, que voluntariamente aceptaron participar en el presente estudio firmando la carta de consentimiento informado, el material biológico fue sangre capilar impregnada en tarjetas FTA. Se determinaron las condiciones físicas y químicas de los componentes de la reacción en cadena de la polimerasa XL-PCR para amplificar un fragmento del gen CYP2D6; contenido del "mix" para un volumen final de 50 uL: buffer 1X, MgS04 1,5 mM, desoxirribonucleósidostrifosfatos (dNTPs) 0,2 mM, primer Fw 0,5 uM, primer Rv 0,5 uM y KOD polimerasa (Hot Start Master Mix) 1,5 U, ADN molde tres "punch"; programa de amplificación: desnaturalización inicial a 95 °C por 5 min, 35 ciclos de 95 °C por 30 s, 65,0 °C por 45 s y 70 °C por 2 min, seguidos por 10 min a 70 °C para la extensión final. Se determinaron las condiciones físicas y químicas de los componentes de la reacción en cadena de la polimerasa PCR anidado, para la detección de los alelos CYP2D6*1, CYP2D6*4 y CYP2D6*6, contenido del "mix" para un volumen final de 50 uL: buffer 1X, MgCI2 1,5 mM, desoxirribonucleósidostrífosfatos (dNTPs) 0,2mM, primer Fw 0,5 uM, primer Rv 0,5 uM y Taq ADN polimerasa 1 U, el ADN molde (amplicón del XL-PCR) 10 uL; programa de amplificación: desnaturalización inicial a 95 °C por 5 min, 35 ciclos de 94 °C por 30 s, 56 °C por 10 s y 72°C por 1 min, seguidos por 5 min a 70 °C para la extensión final. Se determinaron las condiciones físicas y químicas de los componentes de la reacción en cadena de la polimerasa tetraprimer para la detección del alelo CYP2D6*3\ el "mix" para una reacción con un volumen final de 25 uL, conteniendo: buffer 1X, MgCI2 1,5 Mm desoxirribonucleósidostrifosfatos (dNTPs) 0,4 mM, primer CYP2D6*3-3 0,12uM, primer CYP2D6*3-4 /iew0,12uM, primer CYP2D6*3-6 0,3 uM, primer CYP2D6*3-awf 0,3 uM y KOD polimerasa (Hot Start Master Mix) 1,25 U, tres punchs conteniendo ADN de sangre capilar, para cada tubo. La programación fue: desnaturalización inicial a 95 °C por 2 min, 20 ciclos de 94 °C por 30 s, 63°C por 30 s y 72 °C por 1 min, y luego 30 ciclos de 94 °C por 30 s, 53°C por 30 s 72 °C por 1 min. En conclusión: El perfil genético molecular del citocromo CYP2D6 de 20 pacientes con tuberculosis atendidos en el Hospital Regional de Ayacucho, corresponde a 17 pacientes con genes heterocigotos, dentro de las tres posibilidades: *1/*1 ó *1/*4 ó *1/*6; y tres pacientes con genes heterocigotos *1/*3. Las variantes alélicas detectadas en 17 pacientes corresponde a: *1/*1 ó *1/*4 ó *1/*6 y tres pacientes con *1T3; es decir todos presentan genotipos heterocigotos, por tanto todos tienen al menos un alelo *1 que es el silvestre, cuyo fenotipo corresponde a la actividad enzímática normal.