Tiempo de maduración de ovocitos de Vicugna pacos "alpaca" en el desarrollo embrionario por fecundación in vitro, Huancavelica 2011.
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Date
2012
Authors
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Publisher
Universidad Nacional de San Cristóbal de Huamanga
Abstract
Con el objetivo de determinar el tiempo óptimo de maduración nuclear in vitro de ovocitos de Vicugna pacos "alpaca" y evaluar la influencia de éste sobre el desarrollo embrionario post-fecundación in vitro, se utilizaron ovocitos de categoría I y II obtenidos por aspiración folicular de ovarios de alpacas sacrificadas en el Camal Municipal de Huancavelica, éstos fueron madurados en medio TCM-199 suplementado con HEPES 25mM, Piruvato de sodio 0.2 mM, Sulfato de gentamicina 50 µg/ml, FSH 0.02 unidades/ml, Estradiol 17-? 1 µg/ml y Suero Fetal Bovino al 10%, e incubados a 38.5ºC en una atmósfera de aire estéril con 5% CO2 y 90% de humedad por espacio de 24, 28 y 32 h. Transcurrido estos tiempos, los ovocitos fueron retirados del medio y sumergidos en una solución de Hialuronidasa al 0.1% para ser despojados de las células del cúmulo. Los ovocitos fueron fijados en una solución de metanol: ácido acético (3:1) y teñidos con orseina acética al 1% para evaluar el estadío de maduración nuclear (Vesícula Germinal-VG, Vesícula Germinal Rota-GVBD, Metafase I-MI, Metafase II-MII). Luego, se realizó la fecundación in vitro y se evaluó el desarrollo embrionario, para lo cual se procedió a madurar los ovocitos del mismo modo que en el ensayo anterior, conservando los tiempos de 24, 28 y 32 h. Se recuperaron espermatozoides epididimarios en medio Sperm-TALP para luego ser lavados y seleccionados mediante la técnica de Swim-up, se utilizó una concentración promedio de 1.5-2x10? espermatozoides/ml para inseminar los ovocitos. Transcurridas las 18 h de fecundación, los presuntos cigotos fueron transferidos al medio mSOF-IVC e incubados por 7 días a 38.5ºC, en una atmósfera de aire estéril con 5% CO2 y 90% de humedad. Los resultados obtenidos muestran que el mayor porcentaje de maduración nuclear (ovocitos en estadía de metafase II- MII) fue alcanzado a las 32 h de cultivo in vitro con un 65.08%, seguida por el de 28 h con un 50.33% y finalmente el de 24 h con un 46.33%. Por otra parte, en cuanto a los resultados del desarrollo embrionario, se notó que los porcentajes de segmentación y blastocistos, aumentaron gradualmente hacia el mayor tiempo de maduración, siendo el de 32 h el tiempo con el mayor índice de desarrollo alcanzado, con un 60.17% y 17.02% para los estadios de segmentación y blastocisto respectivamente. Se concluye que el tiempo óptimo para la maduración nuclear y la adquisición máxima de la capacidad de desarrollo embrionario in vitro, de ovocitos de alpaca, fue de 32 h, bajo las condiciones del presente estudio.
Description
Keywords
Ovocitos, Maduración in vitro, Fecundación in vitro, Embriones, Vicugna pacos, Biotecnología reproductiva
