Actividad analgésica del extracto hidroalcohólico de las hojas de Mutisia mathewsii Hook & Arn. Presentada por la: Bach. ESLACHIN CUEVAS, FLOR MARIA Asesor: Dr. Q.F. ARONÉS JARA, MARCO ROLANDO 2023 TESIS PARA OBTENER EL TÍTULO PROFESIONAL DE QUÍMICA FARMACÉUTICA Ayacucho - Perú iii A Dios por iluminar mi camino ya que con su gran corazón me bendijo con buenas personas que me guiaron para ser un buen ser humano. v AGRADECIMIENTO A mi alma mater, la Universidad Nacional de San Cristóbal de Huamanga, cuna de grandes profesionales. A la Facultad de Ciencias de la Salud y la Escuela Profesional de Farmacia y Bioquímica por haberme acogido y contribuir a mi formación para ser un profesional de bien. A mi asesor, el Dr. Q.F. ARONES JARA, Marco Rolando, asesor de la presente investigación, quien con su ardua experiencia y de manera incondicional guió el presente trabajo. vii ÍNDICE ÍNDICE DE TABLAS ........................................................................................... ix ÍNDICE DE FIGURAS ......................................................................................... xi ÍNDICE DE ANEXOS ......................................................................................... xiii RESUMEN......................................................................................................... xv I. INTRODUCCIÓN .............................................................................................. 1 II. MARCO TEÓRICO .......................................................................................... 3 2.1. Antecedentes ............................................................................................ 3 2.2. Redacción del marco teórico ..................................................................... 5 2.3. Variables del estudio ................................................................................. 8 2.4. Hipótesis ................................................................................................... 8 III. MATERIALES Y MÉTODOS ........................................................................... 9 3.1. Ubicación .................................................................................................. 9 3.2. Definición de población y muestra ............................................................. 9 3.3. Métodos instrumentales para la recolección de datos ............................... 9 3.4. Procedimiento para la recolección de datos .............................................. 9 3.4.4. Contenido de fenoles totales ............................................................. 10 3.4.5. Contenido de flavonoides.................................................................. 10 3.4.6. Determinación del potencial antioxidante .......................................... 10 3.5. Alcance de investigación ......................................................................... 12 3.6. Diseño experimental ................................................................................ 12 3.7. Análisis de datos ..................................................................................... 12 IV. RESULTADOS ............................................................................................. 13 IV. DISCUSIÓN ................................................................................................. 21 VI. CONCLUSIONES ......................................................................................... 25 VII. RECOMENDACIONES ............................................................................... 27 VIII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS............................................................ 28 viii IX. ANEXOS ...................................................................................................... 33 ix ÍNDICE DE TABLAS xi ÍNDICE DE FIGURAS xiii ÍNDICE DE ANEXOS Pág. Anexo 1. Identificación taxonómica Mutisia mathewsii Hook & Arn. 35 Anexo 2. Curva de calibración de ácido gálico para la cuantificación de fenoles totales en el extracto hidroalcohólico de las hojas de Mutisia mathewsii Hook & Arn. 36 Anexo 3. Curva de calibración de ácido gálico para la cuantificación de flavonoides en el extracto hidroalcohólico de las hojas de Mutisia mathewsii Hook & Arn.” 37 Anexo 4. Estadística descriptiva de la cuantificación de fenoles totales y flavonoides en el extracto hidroalcohólico de las hojas de Mutisia mathewsii Hook & Arn. 38 Anexo 5. Estadística descriptiva, prueba de homocedasticidad, análisis de varianza y comparaciones múltiples del porcentaje de actividad antioxidante por el método DDPH del extracto hidroalcohólico de las hojas de Mutisia mathewsii Hook & Arn. 39 Anexo 6. Estadística descriptiva, prueba de homocedasticidad y prueba de T de Student de la concentración eficiente antioxidante por el método DDPH del extracto hidroalcohólico de las hojas de Mutisia mathewsii Hook & Arn. 40 Anexo 7. Estadística descriptiva, prueba de homocedasticidad, análisis de varianza y comparaciones múltiples del número de contorsiones por efecto del tratamiento con el extracto hidroalcohólico de las hojas de Mutisia mathewsii Hook & Arn en la evaluación de la actividad analgésica. 41 Anexo 8. Estadística descriptiva, prueba de homocedasticidad, análisis de varianza y comparaciones múltiples de la actividad analgésica por efecto del tratamiento con el 42 xiv extracto hidroalcohólico de mathewsii Hook & Arn. las hojas de Mutisia Anexo 9. Molienda de las hojas de Mutisia Mathewsii Hook & Arn. 43 Anexo 10. Evaluación de la actividad analgésica del extracto hidroalcohólico de las hojas de Mutisia mathewsii Hook & Arn. 44 Anexo 11. Certificado de vacunación experimentación de los animales de 45 Anexo 12. Matriz de consistencia 46 xv RESUMEN Mutisia mathewsii Hook & Arn. es una especie nativa de la región de Ayacucho y sus hojas son usadas en forma de decocción como analgésico. El objetivo fue determinar la actividad analgésica del extracto hidroalcohólico de las hojas de M. mathewsii. Los metabolitos se identificaron mediante el análisis cualitativo de ensayo a la gota. El extracto se obtuvo mediante extracción acelerada por solventes usando como solvente etanol 50°. El contenido de fenoles totales (TPC) se cuantificó usando el reactivo de Folin-Ciocalteu y fue expresado como miligramos equivalentes a ácido gálico por gramo de extracto (mg GAE/g) y el contenido de flavonoides (TFC) se cuantificó con el reactivo de tricloruro de aluminio y fue expresada como miligramos equivalentes a rutina por gramo (mg RUE/g). El potencial antioxidante se determinó usando el 2,2-difenil-1- picrilhidracilo (DPPH) y fue expresado como porcentaje de actividad antioxidante (%AA) y concentración eficiente (CE). La actividad analgésica se evaluó mediante el método del retorcimiento inducido por ácido acético en ratones. Los metabolitos secundarios presentes son fenoles y/o taninos, flavonoides y triterpenos y/o esteroides. El TPC y TFC fueron de 244,9 ± 6,4 mg EAG/g y 45,5 ± 0,4 mg ERU/g, respectivamente. El extracto presentó una actividad antioxidante de 54,3 ± 0,3% a 250 µg/mL y una concentración eficiente antioxidante de 217,6 ± 1,8 µg/mL. El extracto hidroalcohólico de las hojas de M. mathewsii presentó actividad analgésica de 62,5% a la dosis de 600 mg/kg. Se concluye que M. mathewsii es una especie con potencial actividad analgésica. Palabras clave: Analgésico, Mutisia mathewsii, extracto hidroalcohólico. 1 I. INTRODUCCIÓN El dolor es una experiencia sensorial y emocional desagradable que se origina en alguna parte del cuerpo, se asocia con un daño tisular real o potencial y actúa como una señal de alarma cuando el cuerpo está lesionado o funciona mal.1 El dolor es el resultado de un estado de enfermedad subyacentes y que viene acompañado de una liberación de mediadores inflamatorios como las prostaglandinas, citoquinas e interleucinas; así mismo, su tratamiento es sintomático.2 Para tratar el dolor se utilizan analgésicos, que son medicamentos que reducen o calman el dolor.2 Entre ellos, los antiinflamatorios no esteroideos ocupan un lugar importante a nivel mundial, debido a que son fármacos que se utilizan en muchas enfermedades durante mucho tiempo, a veces incluso de por vida, para tratar el dolor, la inflamación y el edema; así como la artrosis, la artritis reumatoide artritis, espondilitis anquilosante, etc.3 Sin embargo, dichas terapias suelen estar acompañadas de efectos adversos y tiene un rango terapéutico limitado. En este contexto, hay una necesidad apremiante de investigar y descubrir nuevos fármacos analgésicos a partir de las plantas medicinales.2 En la medicina tradicional se ha evidenciado el uso de plantas medicinales para el tratamiento del dolor. Esta práctica ancestral que se mantiene hasta hoy en día y su uso en la terapia del dolor es muy popular y los reportes de plantas medicinales utilizadas como analgésicos es muy amplia y variada.2 La especie Mutisia mathewsii Hool & Arn, conocida vulgarmente en los andes peruanos como “mancharisqa” o “mancharisa” (asustado), es una especie endémica muy utilizada en el trastorno genitourinario, afecciones de los riñones, y de las vías urinarias, tos, analgésico, entre otros.4,5 Para tal efecto se realizan baños con la decocción de las ramas y flores.4 Entre los estudios sobre M. mathewsii, cabe mencionar al realiza por Condoli,6 quien evidenció que las hojas de M. mathewsii contienen triterpenos y/o 2 esteroides, flavonoides y fenoles y/o taninos; así mismo, reportaron que las hojas presentan un importante contenido de fenoles totales (TPC) y flavonoides (TFC) directamente proporcional a su actividad antioxidante.6 Asimismo, Ccochachi,7 determinó que las hojas de M. mathewsii poseen actividad antiinflamatoria in vitro. Por lo expuesto, la presente investigación pretende determinar la actividad analgésica del extracto hidroalcohólico de las hojas de Mutisia mathewsii, para lo cual se planteó los siguientes objetivos: Objetivo general Determinar la actividad analgésica del extracto hidroalcohólico de las hojas de Mutisia mathewsii Hook & Arn. en ratones de cepa Wistar. Objetivos específicos a) Identificar la presencia de metabolitos secundarios en las hojas de Mutisia mathewsii. b) Cuantificar el contenido de fenoles totales en el extracto hidroalcohólico de las hojas de Mutisia mathewsii. c) Cuantificar el contenido de flavonoides en el extracto hidroalcohólico de las hojas de Mutisia mathewsii. d) Evaluar el potencial antioxidante del extracto hidroalcohólico de las hojas de Mutisia mathewsii. e) Evaluar la actividad analgésica del extracto hidroalcohólico de las hojas de Mutisia mathewsii mediante el método de retorcimiento inducido por ácido acético en ratones. 3 II. MARCO TEÓRICO 2.1. Antecedentes Los estudios de Mutisia mathewsii Hook & Arn. a la actualidad se circunscriben mayoritariamente a aspecto botánicos, tal como refieren Loja Herrera,8 Hurtado et al.,4 y Beltrán et al.9; así como estudios químicos y biológicos preliminares. Respecto a la composición química y actividad biológica se han identificado dos investigaciones realizadas en la Universidad Nacional de San Cristóbal de Huamanga. Condoli,6 informó sobre el contenido de fenoles y actividad antioxidante de M. mathewsii y concluyó que esta especie tiene un potencial contenido de compuestos fenólicos, en especial de flavonoides, e importante actividad antioxidante. Así mismo, Ccochachi,7 determinó que M. mathewsii presenta actividad antiinflamatoria in vitro y recomienda evaluar su actividad analgésica. Las referencias consignadas a continuación son Mutisia acuminata, una especie endémica de nuestro país que reporta numerosas investigaciones, las cuales orientaron la presente investigación. Coaguila et al.,10 evaluaron el efecto analgésico del extracto y crema de hojas de Mutisia acuminata (chinchircuma) en animales de experimentación. El extracto fue obtenido con etanol mediante extracción con soxhlet. La actividad analgésica fue evaluada mediante un estímulo doloroso térmico y un estímulo doloroso eléctrico. Identificaron la presencia de terpenos, flavonoides, saponinas y taninos mediante cromatografía en capa fina. Concluyeron que el extracto presenta efecto analgésico estadísticamente similar al grupo control. Fortuna et al.,11 evaluaron la toxicidad aguda del extracto hidroalcohólico de hojas frescas de Mutisia acuminata en cerebros y cerebelos de ratas albinas. Observaron que durante 14 días de seguimiento no se presentó ningún signo de toxicidad ni alteración en su curva de crecimiento; asimismo, en el día 15, previo sacrificio de los animales, no se evidenció ninguna lesión en los tejidos del cerebro 4 y cerebelos; pero si encontraron presencia de edemas leves y moderados. Concluyeron que el extracto hidroalcohólico de Mutisia acuminata a 5000 mg/kg no presenta toxicidad. Cayampi,12 evaluó la actividad diurética y dosaje de electrolitos del extracto hidroalcohólico de las hojas de Mutisia acuminata en cobayos; asimismo, identificó la presencia de taninos, fenoles, lactonas, flavonoides, saponinas. Demostró que los extractos de 100; 200 y 400 mg/kg presentan actividad diurética dosis dependiente. Omonte,13 evaluó la actividad antioxidante de una crema a base de compuestos fenólicos de flores de Mutisia acuminata. La actividad antioxidante se midió por el método DPPH y los resultados mostraron que la crema al 2% tenía un mejor porcentaje de inhibición de radicales libres (99,7%) en comparación con las cremas al 1% y al 5%. Concluyó que la crema elaborada a base de compuestos fenólicos aislados de Mutisia acuminata presenta actividad antioxidante. A nivel internacional también hay reporte de estudios sobre especies del género Mutisia con información relevante y que fueron tomadas en cuenta en la realización de la presente investigación. Catalano et al.,14 estudiaron las partes aéreas de Mutisia acuminata, y evidenciaron que el extracto hexánico contiene β-amirina, pseudotaraxasterol y lupeol, mientras que el extracto metanólico contiene arbutina, quercetina y quercetina-3-glucurónido. Villegas et al.,15 evaluaron la actividad terapéutica de nueve plantas que se encuentran en la selva amazónica y los Andes cerca de Iquitos, incluida Mutisia acuminata. Examinaron sus propiedades toxicológicas, efectos sobre la presión arterial, el músculo liso y la permeabilidad capilar. M. acuminata no mostró actividad curativa en ratas, sin embargo, aumentó la permeabilidad capilar. Catalano et al.,16 en una comunicación corta sobre la actividad antimicrobiana de extractos de Mutisia acuminata var. Acuminata, divulgaron la actividad biológica de los extractos metanólicos y acuoso de esta especie contra bacterias y hongos (esporas y micelios); así mismo, investigaron el papel del pH del medio en la actividad antimicrobiana. Juárez et al.,17 en su investigación sobre los flavonoides de Mutisia acuminata, evidenció que sus hojas y flores contienen varios compuestos como la quercetina, quercetina-3-glucurónido, isorhamnetin-3-glucurónido y pelargonidina diglucósido; siendo este estudio el primer reporte de antocianinas en el género Mutisia. 5 Viturro et al.,18 realizó el estudio químico del aceite esencial de Mutisia friesiana. Determinaron que el aceite de M. friesiana es un sistema complejo constituido por 127 compuestos, de los cuales los componentes mayoritarios son los monoterpenos β-felandreno, (Z)-β-ocimeno, α y β-pineno y sabineno. Viturro et al.,20 en una comunicación corta sobre los eliminadores de radicales libres de Mutisia friesiana (Asteraceae) y Sanicula graveolens (Apiaceae), determinarpn que el extracto soluble en agua de Sanicula graveolens y Mutisia friesiana mostraron actividad de eliminación de radicales en el ensayo de decoloración DPPH. El aislamiento guiado por bioensayo condujo a derivados del ácido cafeico y flavonoides como los principales compuestos activos de ambas especies. Después de la hidrólisis, el ácido cafeico y la quercetina resultaron ser los principios bioactivos de ambas plantas. 2.2. Redacción del marco teórico 2.2.1. Mutisia mathewsii 2.2.1.1. Identificación sistemática División : Magnoliophyta Clase : Magnoliopsida Sub clase : Asteridae Orden : Asterales Familia : Asteraceae Género : Mutisia Especie : Mutisia mathewsii N. V. : “mancharisqa”, “mancharisa”, “siete sabios”. La constancia fue emitida por la Blga. Laura Aucasime Medina (Anexo 1). 2.2.1.2. Descripción botánica M. mathewsii tiene hojas alternas, simples, sésiles, lineares o linear-lanceoladas, de 50-80 x 1,5-2 mm, ápice filiforme y anular, base péndula, haz glabro o tomentoso. Capítulo solitario, terminal en forma de campana, heteromórfico, de 1,5-2,5 cm de alto, 2 cm de diámetro. El borde tiene forma de lígula, la flor femenina es amarillo-roja, la corola es bilabial, el labio externo está desarrollado, el labio interno es pequeño y filamentoso, y las flores hermafroditas son de disco amarillo. Su pappus es plumoso con muchos pelos tan largos como la corola.8 2.2.1.3. Distribución y hábitat Se ha registrado esta especie en las regiones de Ancash, Ayacucho, Junín y Lima 6 en las regiones ecológicas de Puna Seca y Húmeda (PSH) Altoandina (AA) entre los 3600 - 4500 msnm.9 2.2.1.4. Propiedades y usos medicinales M. mathewsii presenta propiedades contra el dolor de estómago, tos. Por otra parte, también nos mencionan que las hojas y flores se utilizan para combatir los síntomas de afecciones respiratorias virales, contra la fiebre.19 2.2.1.5. Composición química Mutisia mathewsii presenta metabolitos secundarios, tales como, fenoles, lactonas, flavonoides, saponinas.12 2.2.2. Metabolitos secundarios Desde las vías lateral laterales hasta la fotosíntesis, las plantas producen metabolitos secundarios que tienen funciones no nutricionales nutritivas pero que son importantes para su supervivencia. Son compuestos que se utilizan para protegerse de factores externos. Estos incluyen flavonoides, taninos, lignanos, cumarinas, alcaloides, terpenos y saponinas, entre otros.20 2.2.3. Compuestos fenólicos Los fenoles son compuestos ampliamente distribuidos en frutas y verduras. Se derivan de la clase más importante de metabolitos secundarios en plantas, principalmente de fenilalanina y una pequeña cantidad de tirosina. Los compuestos fenólicos constituyen una serie de sustancias presentes en las plantas con diferentes estructuras químicas y actividades metabólicas.21 2.2.4. Flavonoides Los flavonoides constituyen un gran número de metabolitos, que se pueden dividir en varias clases según el nivel de oxidación de sus anillos de pirano. Según el sustituyente o la posición del anillo de benceno en el anillo de pirano, estos pueden ser auronas, catequinas, flavanonas, flavonoles, flavonas, flavonoles.20 Estos compuestos presentan un esqueleto común de difenilpirano (C6-C3-C6) que consta de dos anillos de benceno (A y B) unidos por un anillo C de pirano (heterociclo). Los átomos de carbono en el anillo C y A están numerados del 2 al 8, y los átomos de carbono en el anillo B están numerados del 2' al 6'.22 2.2.5. El dolor 2.2.5.1. Definición del dolor La Asociación Internacional para el Estudio del Dolor (IASP) definió el dolor en 1986 como una experiencia sensorial y emocional desagradable acompañada o descrita por daño tisular real o potencial.23 7 Los estímulos nocivos, como un pinchazo o el calor de una fuente de calor, activan fibras sensoriales especializadas llamadas nociceptores. Esta estimulación genera un potencial de acción que viaja a través de los nervios periféricos hasta la médula espinal, activando otros circuitos neuronales, que a su vez actúan sobre los músculos y generan un reflejo de estremecimiento en la zona afectada para evitar daños mayores. Este dolor es de corta duración.23 2.2.5.2. Tipos de dolor El dolor puede clasificarse como agudo o crónico. La diferencia entre ambos no es únicamente una cuestión de temporalidad:  El dolor agudo es una consecuencia directa de la activación noxa del sistema nociceptivo. Tiene una función bioprotectora. Los síntomas psicológicos son escasos y se limitaron a una ansiedad leve. Es un tipo de dolor nociceptivo que surge debido a la estimulación química, mecánica o térmica de nociceptores específicos.24  El dolor crónico no es protector y no se considera una enfermedad como síntoma. El dolor es constante que puede durar mucho tiempo después de una lesión o incluso en ausencia de una lesión. A menudo es difícil de tratar y se asocia con síntomas psicológicos significativos.24 2.2.6. Antiinflamatorio no esteroideo (AINE) Los AINE son fármacos con estructuras químicas heterogéneas que poseen actividades antipiréticas, antiinflamatorias y analgésicas. Ejercer su efecto al inhibir la producción de prostaglandinas proinflamatorias.25 Los AINE incluyen al ibuprofeno, naproxeno o diclofenaco, entre otros; asimismo, a los inhibidores selectivos de la ciclooxigenasa 2 y el ácido acetilsalicílico (AAS).25 2.2.6.1. Mecanismo de acción de los AINES El mecanismo de acción de los AINE implica la inhibición de la enzima ciclooxigenasa (COX), que es responsable de la producción de prostaglandinas. 26 Las prostaglandinas son sustancias químicas que desempeñan un papel importante en la respuesta inflamatoria del cuerpo, la regulación de la temperatura corporal y la sensación de dolor. Hay dos isoformas principales de la enzima COX: COX-1 y COX-2. La COX-1 es una forma constitutiva de la enzima presente en muchas células del cuerpo, incluyendo las células del revestimiento del estómago y los riñones. La COX-2, por otro lado, se produce principalmente en respuesta a la inflamación y está implicada en el proceso inflamatorio. Los AINE actúan principalmente inhibiendo la COX-1 y la COX-2, lo que reduce la producción de 8 prostaglandinas. Al disminuir los niveles de prostaglandinas, se reduce la inflamación, el dolor y la fiebre. Sin embargo, es importante destacar que los diferentes AINE tienen diferentes grados de selectividad hacia la COX-1 y la COX- 2. 26 Algunos AINE, como el ácido acetilsalicílico (aspirina), tienen una mayor afinidad por la COX-1 y pueden tener efectos secundarios relacionados con el revestimiento del estómago y la coagulación sanguínea. Otros AINE, como el ibuprofeno y el naproxeno, muestran una mayor selectividad hacia la COX-2 y pueden tener menos efectos secundarios gastrointestinales. 26 Es importante tener en cuenta que los AINE pueden tener otros efectos además de la inhibición de la COX, como la interferencia en la agregación plaquetaria, la modulación de la respuesta inmunitaria y la interacción con otros sistemas de señalización celular. Por lo tanto, es recomendable utilizar los AINE bajo la supervisión de un médico y siguiendo las indicaciones adecuadas.26 2.3. Variables del estudio a) Variable independiente Extracto hidroalcohólico de las hojas de Mutisia mathewsii. Indicador: Dosis de 200, 400 y 600 mg/kg. b) Variable dependiente Actividad analgésica. Indicador: Tiempo de reacción ante el dolor. 2.4. Hipótesis Hi: El retorcimiento inducido por ácido acético en ratones disminuye por efecto del extracto hidroalcohólico de las hojas de Mutisia mathewsii. Ho: El retorcimiento inducido por ácido acético en ratones no disminuye por efecto del extracto hidroalcohólico de las hojas de Mutisia mathewsii. 9 III. MATERIALES Y MÉTODOS 3.1. Ubicación La investigación se realizó en los laboratorios del Centro de Desarrollo, Análisis y Control de Calidad de Medicamentos y Fitomedicamentos de la Facultad de Ciencias de la Salud de la Universidad Nacional de San Cristóbal de Huamanga. 3.2. Definición de población y muestra 3.2.1. Población Hojas de Mutisia mathewsii Hook & Arn. 3.2.2. Muestra Un kilo de hojas de Mutisia mathewsii Hook & Arn. 3.2.3. Unidad experimental Veinticinco ratones macho de cepa Wistar de 20 a 25 g de peso aproximadamente que serán adquiridas de la Universidad Cayetano Heredia (Anexo 11, certificado de vacunación). 3.3. Métodos instrumentales para la recolección de datos Para la evaluación de la actividad analgésica se utilizará la prueba de retorcimiento inducido por ácido acético en ratones de experimentación. 3.4. Procedimiento para la recolección de datos 3.4.1. Recolección de la muestra Las hojas fueron recolectadas durante el mes de julio en el centro poblado de Huaraca, del distrito de Vinchos, de la provincia de Huamanga, del departamento de Ayacucho. Huaraca se ubica a una altitud de 3627 msnm y con coordenadas geográficas de 13°18'58.9" latitud sur, 74°26'55.8" longitud oeste. Las hojas se secaron por liofilización en un liofilizador LABOTEC.27 Las hojas secas liofilizadas fueron molidas en un molino de cuchillas y tamizados hasta obtener un tamaño de partícula mayor a 100 µm. 10 3.4.2. Identificación fitoquímica La identificación de los metabolitos secundarios fue realizada mediante el método de análisis cualitativo de ensayo a la gota.28 3.4.3. Preparación del extracto hidroalcohólico La extracción se realizó mediante el método de extracción acelerada por solventes utilizando el Extractor Acelerado de Solventes Dionex™ ASE 150.29 Para ello, un gramo de hojas secas y molidas se mezclaron con 0,5 gramos de tierra de diatomea y fueron colocados en una celda de acero inoxidable de 10 mL. El solvente de extracción fue una mezcla hidroalcohólica de 50°. La extracción se realizó a 100 °C, con un tiempo estático de 5 minutos, 3 ciclos estáticos, 66% de volumen de enjuague, tiempo de purga de 160 segundos y a 1500 psi. El extracto fue recolectado en un frasco de 120 mL. El extracto se concentró en un rotavapor a 40 °C y luego fue liofilizado. 3.4.4. Contenido de fenoles totales El contenido de compuestos fenólicos (TPC) se cuantificó mediante el método de Folin-Ciocaleteu (RFC).30 Para ello se preparó una solución del extracto a una concentración de 320 µg/mL. Se adicionó 500 µL de RFC (1:10) a 100 µL de la solución del extracto y luego 400 µL de Na2CO3 al 7,5%. La reacción produjo una coloración azul directamente proporcional al contenido de fenoles totales, cuya absorbancia se midió a 765 nm. El TPC se expresó como miligramos equivalentes a ácido gálico por gramo de extracto hidroalcohólco (mg GAE/g), calculados a partir de una curva de calibración ácido gálico. 3.4.5. Contenido de flavonoides El contenido de flavonoides (TFC) se determinó mediante el método del tricloruro de aluminio.30 A 2,0 mL de una solución del extracto de 800 μg/mL se adicionó 0,5 mL de AlCl3 2% y se completó a volumen de 5,0 mL con etanol 50°. Transcurrido 30 min se midió las absorbancias a 415 nm. El TFC se expresó en miligramos equivalentes de rutina por gramo de extracto (mg RUE/g), calculados a partir de una curva de calibración de rutina. 3.4.6. Determinación del potencial antioxidante La actividad antioxidante se determinó mediante el método de DPPH.30 El método consistió en evaluar la disminución de la absorbancia de una solución de DPPH a 515 nm, por adición de 300 µL de solución del extracto hidroalcohólico y/o Trolox a 2,7 mL de solución de DPPH (40 µg/mL). El tiempo reacción evaludo fue después de 30 min calibrando el espectrofotómetro con el blanco (300 μL de agua https://www.tecnofrom.com/producto_234-extractor-de-solventes-acelerado-dionex-trade-ase-trade-350.html https://www.tecnofrom.com/producto_234-extractor-de-solventes-acelerado-dionex-trade-ase-trade-350.html https://www.tecnofrom.com/producto_234-extractor-de-solventes-acelerado-dionex-trade-ase-trade-350.html https://www.tecnofrom.com/producto_234-extractor-de-solventes-acelerado-dionex-trade-ase-trade-350.html https://www.tecnofrom.com/producto_234-extractor-de-solventes-acelerado-dionex-trade-ase-trade-350.html https://www.tecnofrom.com/producto_234-extractor-de-solventes-acelerado-dionex-trade-ase-trade-350.html https://www.tecnofrom.com/producto_234-extractor-de-solventes-acelerado-dionex-trade-ase-trade-350.html https://www.tecnofrom.com/producto_234-extractor-de-solventes-acelerado-dionex-trade-ase-trade-350.html 11 y 2,7 mL de DPPH). Primero se elaboró una curva de calibración de DPPH de la variación de la concentración de la absorbancia en función de la concentración de DPPH (1 a 40 µg/mL). Luego se preparó soluciones del extracto y/o Trolox de 25 a 250 µg/mL a los cuales se adicionó la solución de DPPH (40 µg/mL) y se calculó la concentración remanente de DPPH a partir de la curva de calibración de DPPH, según la ecuación. [DPPH]T=t %DPPHREM = [DPPH] × 100 donde [DPPH]T=t es la concentración remante de DPPH a los 30 minutos y [DPPH]T=0 es la concentración inicial de DPPH. Posteriormente se calculó la concentración eficiente (CE) a partir de una curva exponencial obtenida de los valores del porcentaje de DPPH remanente en función de la concentración de la muestra (μg/mL) o del Trolox. Para ello se usó el software OriginPro 8 También se calculó el porcentaje de actividad antioxidante (%AA) para cada concentración del extracto y/o Trolox, mediante la ecuación: Ac − (Am − Ab) AA(%) = [ Ac ] × 100 donde Ac es la absorbancia inicial de DPPH; Am es la absorbancia de la muestra y Ab es la Absorbancia del blanco. 3.4.7. Evaluación de la actividad analgésica La actividad analgésica se evaluó mediante la prueba de retorcimiento inducido por ácido acético en ratones según lo descrito en la publicación Balkrishna.31 Los ratones se dividieron aleatoriamente en cinco grupos de cinco cada uno. Los animales del grupo I recibieron un tratamiento de ácido acético por vía oral. Los ratones de los grupos II al IV recibieron tratamiento de extracto liofilizado a las dosis de 200, 400 y 600 mg/kg por vía oral; mientras que el grupo V recibió un tratamiento de diclofenaco sódico de 100 mg/kg por vía oral. Los extractos se administraron dos horas antes de inducir la nocicepción mediante la administración de ácido acético al 0,75% por vía intraperitoneal y luego de cinco minutos se contó el número de contorsiones en cada ratón durante 15 minutos. Una disminución en el número de contorsiones indicó la actividad antinociceptiva. El efecto analgésico porcentual se calculó utilizando la siguiente fórmula: %Actividad analgésica = Wc − Wt × 100 Wc T=0 https://www.sciencedirect.com/topics/pharmacology-toxicology-and-pharmaceutical-science/antinociception https://www.sciencedirect.com/topics/pharmacology-toxicology-and-pharmaceutical-science/antinociception 12 Wc es el número promedio de retorcimientos en grupo control y W t es el número promedio de retorcimientos en cada grupo de tratamiento. 3.5. Alcance de investigación El alcance de investigación es explicativo.32 3.6. Diseño experimental El diseño es de tipo experimental de posprueba únicamente y grupo control.32 Simbólicamente y de forma abreviada corresponde a: RGn X On RGc -- Oc Donde RGn en el grupo experimental y RGc el grupo control; X es el tratamiento con extracto y/o diclofenaco más ácido acético, O es la observación de número de contorsiones y (--) ausencia de estímulo. El diseño experimental para evaluar la actividad analgésica fue de cinco tratamientos y cinco repeticiones por grupo. 3.7. Análisis de datos Los resultados se presentan en tablas y figuras. Las diferencias significativas entre los tratamientos se evaluaron mediante análisis de varianza (ANOVA), la prueba de T de Student de muestras indepedientes y prueba de comparaciones múltiples de Tukey con un nivel de confianza del 95 %. 13 IV. RESULTADOS 15 Tabla 1. Identificación de metabolitos secundarios en las hojas de Mutisia mathewsii Hook & Arn. Metabolitos secundarios Ensayos Resultados Observaciones Triterpenos y/o esteroides Lieberman-Burchard + Verde con halo marrón Quinonas Bortranger - Flavonoides Shinoda + Coloración amarilla Glicósidos cardiotónicos Kedde - Fenoles y/o taninos Cloruro férrico + Coloración verde Antocianinas HCl - NaOH - Alcaloides Dragendorff Mayer Hager - - - - - - Saponinas Espuma - - Lactonas y/o cumarinas Baljet - - 16 Extracto hidroalcohólco de M. mathewsii 500,0 400,0 300,0 200,0 100,0 0,0 Nota: Curva de calibración de ácido gálico (y = 0,0085x – 0,0055); Curva de calibración de rutina (y = 0,0206x – 0,0048). Figura 1. Contenido de fenoles totales y flavonoides en el extracto hidroalcohólico de las hojas de Mutisia mathewsii Hook & Arn. 244,9 45,6 Fenoles totales (GAE mg/g) Flavonoides (RUE mg/g) Extracto hidroalcohólico de M. mathewsii C o n te n id o 17 Extracto hidroalcohólico-M. mathewsii 100,0 80,0 60,0 40,0 20,0 0,0 Nota: Prueba de comparaciones múltiples de Tukey al 95% de nivel de confianza: a, b,… y h son subconjuntos homogéneos. Figura 2. Actividad antioxidante del extracto hidroalcohólico de las hojas de Mutisia mathewsii Hook & Arn. h h h g f e d d c b a b 25 50 100 150 200 250 25 50 100 150 200 250 Extracto hidroalcohólico de M. mathewsii Trolox P o te n c ia l a n ti o x id a n te - - D P P H ( % ) 18 Extracto hidroalcohólico-M. mathewsii 1000,0 800,0 600,0 400,0 200,0 0,0 Extracto hidroalcohólico de M. mathewsii Trolox Nota: Concentración eficiente calculada a partir de la ecuación de recta del extracto (y = -0,188x + 85,3) y la ecuación exponencial del Trolox (y = 95,8 – 206,4.e^-0.04x); Prueba de T de Student de muestras independientes al 95% de nivel de confianza; * diferencia significativa. Figura 3. Concentración eficiente antioxidante del extracto hidroalcohólico de las hojas de Mutisia mathewsii Hook & Arn. 217,63* 37,4* C c o n c e n tr a c ió n e fe ic ie n te D P P H (µ g /m L ) 19 mg/kg 50,0 40,0 30,0 20,0 10,0 0,0 Blanco 200 mg/kg 400 mg/kg 600 mg/kg Diclofenaco Extracto hidroalcohólico de Mutisia mathewsii sódico 100 Tratamiento Nota: Prueba de comparaciones múltiples de Tukey al 95% de nivel de confianza: a, b,… y e son subconjuntos homogéneos. Figura 4. Número de contorsiones por efecto del tratamiento con el extracto hidroalcohólico de las hojas de Mutisia mathewsii Hook & Arn en la evaluación de la actividad analgésica. C o n to rs io n e s (N ) 20 mg/kg 100,0 80,0 60,0 40,0 20,0 0,0 200 mg/kg 400 mg/kg 600 mg/Kg Diclofenaco Extracto hidroalcohólico de Mutisia mathewsii sódico 100 Tratamiento Nota: Prueba de comparaciones múltiples de Tukey al 95% de nivel de confianza: a, b,… y d son subconjuntos homogéneos. Figura 5. Actividad analgésica por efecto del tratamiento con el extracto hidroalcohólico de las hojas de Mutisia mathewsii Hook & Arn en comparación con indometacina. d c b a A c ti v id a d a n a g lé s ic a (% ) 21 IV. DISCUSIÓN Mutisia mathewsii es una especie nativa de la región de Ayacucho en Perú y sus hojas y flores son usadas en forma de decocción como analgésico.4,5 Por ello, esta investigación tuvo como objetivo determinar la actividad analgésica del extracto hidroalcohólico de las hojas de Mutisia mathewsii en ratones de cepa Wistar. Las hojas de M. mathewsii fueron recolectadas en el centro poblado de Huaraca del distrito de Vinchos en el departamento de Ayacucho. La identificación de los metabolitos secundarios se realizó en las hojas liofilizadas de M. mathewsii. Se obtuvo el extracto hidroalcohólico liofilizado a partir de las hojas liofilizadas de M. mathewsii mediante el método de extracción acelerada de solventes. Se obtuvo el extracto usando como solvente una mezcla hidroalcohólica de 50° y se evaluó algunos parámetros de calidad como es el contenido de fenoles totales, flavonoides, así como la actividad antioxidante in vitro. La actividad analgésica del extracto hidrolalcohólico, obtenido con etanol de 50°, se evaluó mediate la prueba de retorcimiento inducido por ácido acético en ratones. En la Tabla 1 se presenta los resultados de la identificación de metabolitos en las hojas de M. mathewsii, en el que se destaca la presencia de fenoles y/o taninos, flavonoides y triterpenos y/o esteroides. Los resultados obtenidos son coherentes con lo reportado por Condoli.6 Los metabolitos secundarios con actividad antioxidante son compuestos producidos por las plantas y otros organismos que pueden proteger contra el daño oxidativo causado por los radicales libres. Algunos de los metabolitos secundarios más conocidos con actividad antioxidante incluyen los polifenoles, carotenoides, flavonoides, el ácido ascórbico, el ácido elágico. Asimismo, se ha demostrado que tiene propiedades antioxidantes, analgésicas y antiinflamatorias.27 Estos son solo algunos ejemplos de metabolitos secundarios con actividad antioxidante. Hay 22 muchos otros compuestos presentes en alimentos y plantas que también pueden tener propiedades antioxidantes y beneficios para la salud. De la cuantificación de compuestos fenólicos, el extracto hidroalcohólico liofilizado presentó un contenido de fenoles totales de 244,9 ± 6,4 mg GAE/g de extracto liofilizado (Figura 1) calculado a partir de una curva de calibración de ácido gálico (y = 0,0085x – 0,0055) (Anexo 2). El contenido de flavonoides fue de 45,5 ± 0,4 mg RUE/g de extracto liofilizado (Figura 1) calculado a partir de una curva de calibración de rutina (y = 0,0206x – 0,0048) (Anexo 3). El contenido de fenoles totales es aproximado a lo reportado por Condoli,6 quien reportó valores de 262,3 mgGAE/g; aunque con un valor de contenido de flavonoides es inferior. La actividad antioxidante fue determinada por el método in vitro DPPH y fue expresado como porcentaje de actividad antioxidante (%AA). La actividad antioxidante fue evaluada a las concentraciones de 25 µg/mL a 250 µg/mL y fue comparada con el Trolox a las mismas concentraciones. El extracto hidroalcohólico liofilizado de M. mathewsii presentó una actividad antioxidante directamente proporcional a su concentración, presentado un valor de 54,3 ± 0,3% a 250 µg/mL (Figura 2 y Anexo 5) aunque estadísticamente menor al Trolox a las concentraciones de 100 a 250 µg/mL (Figura 2 y Anexo 5). La actividad antioxidante también fue expresada como concentración eficiente antioxidante (CE). La CE del extracto fue calculada a partir de la ecuación de la recta (y = -0,188x + 85,3) de la variación de la actividad antioxidante (%AA) en función de la concentración (µg/mL), que fue comparada con la CE50 del Trolox calculada a partir de la ecuación exponencial (y = 95,8 – 206,4.e^-0.04x). Cabe mencionar que el CE es inversamente proporcional a la actividad antioxidante, quiere decir que a menor CE mayor actividad antioxidante. El extracto hidroalcohólico liofilizado de M. mathewsii presentó un CE de 217,6 ± 1,8 µg/mL (Figura 3 y Anexo 6) aunque estadísticamente diferente al Trolox que presentó un valor de 37,4 ± 0,1 µg/mL (Figura 3 y Anexo 6). Condoli, reportó un valor de concentración eficiente antioxidante de 262,6 µg/mL que se aproxima a lo evidenciado en esta investigación. Respecto a la evaluación de la actividad analgésica, se evaluó el número de contorsiones producidas por la administración de ácido acético al 0,75% reportando un promedio de 33,6 ± 0,7 contorsiones. Seguidamente de evaluó el número de contorsiones producidas por efecto de ácido acético previa administración del extracto a diferente dosis y de indometacina, con la finalidad de 23 determinar la reducción del número de contorsiones. Se evidenció que el extracto a dosis de 600 mg/kg redujo significativamente (p < 0,05) el número de contorsiones de 33,6 ± 0,7 a 12,6 ± 0,6 (Figura 4 y Anexo 7), aunque la reducción del número de contorsiones fue significativamente mayor (p< 0,05) tras la administración de diclofenaco sódico 100 mg/kg. De tal manera que el extracto a la dosis de 600 mg/kg presentó un 62,5% estadísticamente mayor que las dosis de 200 y 400 mg/kg, aunque estadísticamente inferior a la indometacina 100 mg/kg (p < 0,05). El potencial antioxidante se atribuye a compuestos fenólicos como los flavonoides, sin embargo, dependerá de factores como la cantidad y posición de los grupos hidroxilo.33 Los flavonoides actúan a través de la transferencia de electrones a los radicales libres. En este caso, los estudios han informado que los flavonoides que presentan en su composición no más de dos grupos hidroxilo son antioxidantes prometedores, debido a un mayor número de grupos hidroxilo que pueden cambiar su configuración estructural. Otro factor con el que se relaciona la actividad es el doble enlace entre C2=C3, que se encarga de conferir un desplazamiento entre los anillos y la expansión electrónica, sin embargo, existe la necesidad de identificar los componentes del extracto para dilucidar sus estructuras.34 Respecto a la actividad analgésica, Diaz,35 utilizando el mismo método, reportó una disminución del número de contorsiones de 36 a 8 por efecto del extracto atomizados de hojas de Solanum nitidum, con un porcentaje de actividad analgésica de 77,8%, valor superior a lo obtenido con el extracto hidrolalcohólico de hojas de M. mathewsii. El retorcimiento en ratones por efecto del ácido acético se ha asociado con la liberación de sustancias endógenas como serotonina, histamina, prostaglandina y bradiquinina y los resultados obtenidos en esta prueba sugieren que el extracto de M. mathewsii posee propiedades analgésicas periféricas.36 Entre los flavonoides con reconocida actividad analgésica tenemos a la quercetina.37 Los metabolitos secundarios con actividad analgésica son compuestos que pueden aliviar el dolor en el cuerpo. Aquí hay algunos ejemplos de metabolitos secundarios con propiedades analgésicas: alcaloides, terpenoides, salicilatos, glicosaminoglicanos. Además, es importante tener en cuenta que el uso de metabolitos secundarios con actividad analgésica puede variar según la forma de administración, la dosis y las necesidades individuales. Siempre es recomendable 24 consultar a un profesional de la salud antes de usar cualquier compuesto con fines analgésicos.27 La actividad analgésica en cierto modo tiene relación con la actividad antiinflamatoria. Ccochachi,7 determinó que las hojas de M. mathewsii posee actividad antiinflamatoria, evaluada por el método de edema plantar inducido por carragenina. Y se informado que los flavonoides tienen actividad antiinflamatoria a través de muchas acciones, incluyendo la inhibición de factores de transcripción y enzimas reguladoras que tienen un papel crucial en el control de mediadores involucrados en la inflamación; además son capaces de eliminar ROS y mejorar los mecanismos inmunes y las células; modular el proceso secretor; actuar sobre las enzimas del ácido araquidónico mediante la inhibición de la lipoxigenasa actividad; modular de la transducción de señales; inhibir de la síntesis de leucotrienos; inhibir la producción de citoquinas (prostaglandinas, No sintasa, IL, TNF-alfa) y; modular de la actividad enzimática; inhibir la COX-2.37 Por los considerandos expuesto se puede afirmar que M. mathewsii es una especie con potencial para seguir estudios más profundos respecto a su composición química y actividad analgésica. 25 VI. CONCLUSIONES 1. Las hojas de M. mathewsii contienen fenoles y/o taninos, flavonoides y triterpenos y/o esteroides. 2. El contenido de fenoles totales y flavonoides en el extracto hidroalcohólico de las hojas de M. mathewsii fue de 244,9 ± 6,4 mg GAE/g y 45,5 ± 0,4 mg RUE/g, respectivamente. 3. El extracto hidroalcohólico de las hojas de M. mathewsii presentó una actividad antioxidante de 54,3 ± 0,3% a 250 µg/mL y una concentración eficiente antioxidante de 217,6 ± 1,8 µg/mL. 4. El extracto hidroalcohólico de las hojas de M. mathewsii presentó actividad analgésica de 62,5% a la dosis de 600 mg/kg. 27 VII. RECOMENDACIONES 1. Se recomienda realizar el estudio de la composición química de las hojas de M. mathewsii mediante técnicas cromatográficas y espectroscópicas. 2. Evaluar la actividad analgésica y antiinflamatoria de las hojas de M. mathewsii mediante otras técnicas in vivo e in vitro. 3. Evaluar la actividad biológica de las hojas de M. mathewsii en diferentes fracciones obtenidas con diferentes solventes. 28 VIII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 1. Font E. Analgesia y analgésicos. Offarm. 2002; 21(9): 70–8. 2. Estella OU, William AC, Patrick O, Ikenna C, Mba T, Obinna O, et al. Evaluation of the analgesic and antipyretic activity of methanol extract of Combretum bauchiense Hutch & Dalziel (Combretaceae) leaves. Phytomedicine Plus. 2022; 2(1): 100166. doi:10.1016/j.phyplu.2021.100166 3. Villajulca Carranza TL. Tendencia de consumo de analgésicos antiinflamatorios no esteroideos dispensados en establecimientos farmacéuticos de Trujillo, 2015-2018 [Tesis de pregrado]. [La Libertad]: Universidad Nacional de Trujillo; 2018. 4. Hurtado-Huarcaya J, Castañeda R, Albán J. Asteráceas medicinales en dos comunidades andinas del sur del Perú: Quinua (Ayacucho) y Lircay (Huancavelica). Bol Latinoam Caribe Plantas Med Aromat. 2021; 20(4): 351–66. 5. Hensen I. 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Error promedio Contenido de Extracto hidroalcohólico 3 244,9 11,0 6,4 fenoles totales Contenido de flavonoides Extracto hidroalcohólico 3 45,6 0,6 0,4 39 Anexo 5 40 Anexo 6 41 Anexo 7 42 Anexo 8 43 44 45 Anexo 11 Certificado de vacunación de los animales de experimentación 46 Anexo 10 Matriz de consistencia TÍTULO PROBLEMA OBJETIVOS HIPÓTESIS VARIABLES MARCO TEÓRICO DISEÑO METODOLÓGICO Actividad analgésica del extracto hidroalcohólico de las hojas de Mutisia mathewsii Hook & Arn. ¿El extracto hidroalcohólico de las hojas de Mutisia mathewsii tendrá actividad analgésica en ratones? Objetivo general Determinar la actividad analgésica del extracto hidroalcohólico de las hojas de Mutisia mathewsii en ratones de cepa Wistar. Objetivos específicos:  Evaluar el retorcimiento inducido por ácido acético en ratones por efecto del extracto hidroalcohólico de hojas de Mutisia mathewsii. El extracto hidroalcohólico de las hojas de Mutisia mathewsii posee actividad analgésica. Variable independiente Extracto hidroalcohólico de las hojas de Mutisia mathewsii. Indicador: Dosis de 200, 400 y 600 mg/kg. Variable dependiente Actividad analgésica Indicador: Tiempo de reacción ante el dolor. Coaguila y yauri en el 2014 evaluaron el efecto analgésico tópico del extracto y crema de hojas de Mutisia acuminata (chinchircuma) en animales de experimentación”. Fortuna en el 2013 evaluó la toxicidad aguda del extracto hidroalcohólico de hojas frescas de Mutisia acuminata R.&P. “chinchilcuma” en cerebros y cerebelos de ratas albinas cepa Holtzmann”. Tipo de investigación: Aplicada Población: Hojas de Mutisia mathewsii procedentes del centro poblado Huaraca, del distrito de Vinchos, provincia dee Huamanga. Muestra: Un kilo de hojas secos de Mutisia mathewsii, recolectadas del centro poblado de Huaraca, distrito de Vinchos. Unidad experimental: Veinticinco ratones de cepa Wistar con 20-25 g de peso. Metodología Este estudio será realizado conforme al método descrito por Koster et al con algunas modificaciones. Diseño experimental Diseño experimental con posprueba y grupo control. Análisis estadístico Los resultados se presentan en tablas y figuras. Las diferencias significativas entre los tratamientos se evaluaron mediante análisis de varianza (ANOVA), la prueba de T de Student de muestras indepedientes y prueba de comparaciones múltiples de Tukey con un nivel de confianza del 95 %. CONSTANCIA DE ORIGINALIDAD PRIMERA INSTANCIA DE TRABAJO DE TESIS - 015 - 2023 El suscrito docente – instructor responsable de operativizar, verificar, garantizar y controlar la originalidad de los trabajos de tesis de la Escuela Profesional de Farmacia y Bioquímica designado por Resolución Decanal N° 0453 – 2023 – UNSCH – FCSA/D de fecha 15 de mayo de 2023, deja constancia que el trabajo de tesis titulado: “Actividad analgésica del extracto hidroalcohólico de las hojas de Mutisia mathewsii Hook & Arn.” Autor: Bach. Flor Maria ESLACHIN CUEVAS Asesor: Profesor Marco Rolando ARONÉS JARA Ha sido sometido al análisis del sistema antiplagio TURNITIN concluyendo que presenta un porcentaje de 25 % de Índice de Similitud. Por lo que, de acuerdo con el porcentaje establecido en el Artículo 13 del Reglamento de Originalidad de Trabajos de Investigación de la Universidad Nacional de San Cristóbal de Huamanga es procedente conceder la Constancia de Originalidad en Primera Instancia. Ayacucho, 02 de agosto de 2023 Mg. Enrique Javier Aguilar Felices Químico Farmacéutico Firmado digitalmente por Enrique Javier Aguilar Felices Fecha: 2023.08.02 23:08:02 -05'00' Mg. Enrique Javier AGUILAR FELICES Docente – Instructor cc. Archivo DOCENTES INSTRUCTORES DEL SOFTWARE ANTIPLAGIO ESCUELA PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA Asesora CONSTANCIA DE ORIGINALIDAD SEGUNDA INSTANCIA: TESIS DE PREGRADO (C°30-2023-EPFB-UNSCH) La que suscribe, directora de escuela y docente instructor en segunda instancia de Tesis de Pregrado, luego de verificar la originalidad de la tesis de la Escuela profesional de Farmacia y bioquímica de la Facultad de Ciencias de la Salud, en representación de la decana y delegada por Resolución Decanal N° 077-2021-UNSCH-FCSA/D, deja constancia que el trabajo de tesis titulado: Actividad analgésica del extracto hidroalcohólico de las hojas de Mutisia mathewsii Hook & Arn. Presentado por: Bach. ESLACHIN CUEVAS, Flor Maria Ha sido sometido al análisis mediante el sistema TURNITIN concluyendo que presenta un porcentaje de 23% de índice de similitud. Por lo que, de acuerdo con el porcentaje establecido en el Artículo 13° del Reglamento de Originalidad de Trabajos de investigación de pregrado de la UNSCH. Por tanto, ES PROCEDENTE conceder la Constancia de originalidad en segunda instancia. Ayacucho, 05 de agosto del 2023 Docente. Instructor Segunda instancia cc. Archivo. FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD ESCUELA PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA Actividad analgésica del extracto hidroalcohólico de las hojas de Mutisia mathewsii Hook & Arn.” por Flor Maria Eslachin Cuevas Fecha de entrega: 05-ago-2023 01:31a.m. (UTC-0500) Identificador de la entrega: 2141590606 Nombre del archivo: Tesis_Flor_Eslachin_Cuevas.pdf (953.24K) Total de palabras: 7920 Total de caracteres: 44550 23 Actividad analgésica del extracto hidroalcohólico de las hojas de Mutisia mathewsii Hook & Arn.” INFORME DE ORIGINALIDAD % INDICE DE SIMILITUD 23% FUENTES DE INTERNET 9% PUBLICACIONES 21% TRABAJOS DEL ESTUDIANTE FUENTES PRIMARIAS 1 Submitted to Universidad Nacional de San Cristóbal de Huamanga Trabajo del estudiante repositorio.unsch.edu.pe Fuente de Internet revistas.sqperu.org.pe Fuente de Internet repositorio.uwiener.edu.pe Fuente de Internet revistas.unsch.edu.pe Fuente de Internet tesis.ucsm.edu.pe Fuente de Internet innovareacademics.in Fuente de Internet revplantasmedicinales.sld.cu Fuente de Internet 13% 5% 1% 1% 1% 1% 1% 1% 2 3 4 5 6 7 8 9 10 jpps.juw.edu.pk Fuente de Internet phcogres.com Fuente de Internet <1% <1% Excluir citas Activo Excluir bibliografía Activo Excluir coincidencias < 30 words Bach. ESLACHIN CUEVAS, FLOR MARIA Dr. Q.F. ARONÉS JARA, MARCO ROLANDO AGRADECIMIENTO ÍNDICE ÍNDICE DE TABLAS ÍNDICE DE FIGURAS ÍNDICE DE ANEXOS RESUMEN I. INTRODUCCIÓN Objetivo general Objetivos específicos II. MARCO TEÓRICO 2.1. Antecedentes 2.2. Redacción del marco teórico 2.2.1.2. Descripción botánica 2.2.1.3. Distribución y hábitat 2.2.1.4. Propiedades y usos medicinales 2.2.1.5. Composición química 2.2.2. Metabolitos secundarios 2.2.3. Compuestos fenólicos 2.2.4. Flavonoides 2.2.5. El dolor 2.2.5.2. Tipos de dolor 2.2.6. Antiinflamatorio no esteroideo (AINE) 2.2.6.1. Mecanismo de acción de los AINES 2.3. Variables del estudio Indicador: 2.4. Hipótesis III. MATERIALES Y MÉTODOS 3.1. Ubicación 3.2. Definición de población y muestra 3.2.2. Muestra 3.2.3. Unidad experimental 3.3. Métodos instrumentales para la recolección de datos 3.4. Procedimiento para la recolección de datos 3.4.2. Identificación fitoquímica 3.4.3. Preparación del extracto hidroalcohólico 3.4.4. Contenido de fenoles totales 3.4.5. Contenido de flavonoides 3.4.6. Determinación del potencial antioxidante 3.4.7. Evaluación de la actividad analgésica 3.5. Alcance de investigación 3.6. Diseño experimental 3.7. Análisis de datos IV. RESULTADOS IV. DISCUSIÓN VI. CONCLUSIONES VII. RECOMENDACIONES VIII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS IX. ANEXOS Anexo 2 Anexo 4 Anexo 5 Anexo 7 Anexo 11 Anexo 10