Evaluación de dos protocolos para la vitrificación de embriones bovinos producidos por fecundación in vitro utilizando el medio SOF, INIA - Ayacucho

Abstract

En el estudio se planteó como objetivos determinar el mejor protocolo para la vitrificación de embriones bovinos producidos por fecundación in vitro utilizando el medio SOF, de igual manera determinar la viabilidad mediante el mantenimiento de re-expansión y calidad morfológica de los embriones bovinos post desvitrificación a las 6 y 18 h de cultivo. Las técnicas de vitrificación ensayadas fueron: 1) Vajta con concentraciones de MM + 7,5% EG + 7,5% DMSO y MM + 16,5% EG + 16,5% DMSO + sucrosa 0,5M como criopreservante, 2) Von Baer con 5% glicerol + 5% etilenglicol + 0,2 M sucrosa + 10% Suero fetal bovino + 50 ug/ml Gentamicina y 20 % Glicerol + 20 % etilenglicol + 0,5 M Sucrosa + 10% Suero fetal bovino + 50 ug/ml Gentamicina. Se emplearon embriones producidos por fecundación in vitro (n: 101, 101 por protocolo). La desvitrificación se efectuó en agua atemperada a 37 °C/1 min para ambos métodos respectivamente. Se retiraron los crioprotectores en una solución de 1,2 ml de MM + sucrosa 0,25M, 1 ml de MM + sucrosa 0,15M y 800 μl de MM durante 15 min para el primer protocolo y 100 μl de sucrosa 0,5M y sucrosa 0,2M durante 10 min para el segundo protocolo. Luego de desvitrificados, se colocaron en placas de 4 pocillos con microgotas de 200 μl de SOF+10% SFB para el primer protocolo y 200 μl de SOF + 20% de Suero Fetal para el segundo protocolo, para ser cultivados y evaluados morfológicamente. Se evaluó el porcentaje de embriones recuperados al momento de la desvitrificación, porcentaje de embriones viables desvitrificados a las 6 y 18 h del cultivo y el porcentaje de embriones degenerados desvitrificados a las 18 h. En los embriones recuperados al momento de la desvitrificación se encontró que para el primer método se obtuvo un 85,10 % de embriones recuperados y para el segundo un 76,20 %, no existiendo diferencia estadísticamente significativa (P>0,05) para ambas técnicas. En cuanto a la evaluación morfológica el porcentaje de los embriones viables a las 6 h para el protocolo Vajta fue de 27,80 % y para el segundo protocolo Von Baer fue de 49,60 %, existiendo diferencia estadísticamente significativa (P<0,05), para ambos protocolos. De igual manera señalar que el porcentaje de embriones viables a las 18 h para Vajta fue de 21,60% y para Von Baer fue de 41,30%, existiendo diferencia estadísticamente significativa (P<0,05). Finalmente el porcentaje de embriones degenerados desvitrificados a las 18 h del cultivo, para el primer protocolo se obtuvo un 78,40% de embriones degenerados y para el segundo protocolo un 58,70%, existiendo diferencia estadísticamente significativa (P<0,05). En base a los datos obtenidos se concluye que la vitrificación de embriones bovinos producidos in vitro utilizando la técnica de Von Baer fue mejor con respecto al método Vajta, siendo una alternativa a considerar para futuras investigaciones de criopreservación de embriones de vacas genéticamente mejoradas.