Efecto de factores de crecimiento sobre la tasa de maduración de ovocitos y desarrollo embrionario in vitro de alpaca
Loading...
Date
2018
Journal Title
Journal ISSN
Volume Title
Publisher
Universidad Nacional de San Cristóbal de Huamanga
Abstract
La escasa información existente sobre la producción in vitro de embriones de alpaca y considerando la maduración in vitro de ovocitos como una primera etapa fundamental que antecede a las demás etapas del proceso, sugiere estudiar y evaluar factores involucrados en ésta; por ello, el objetivo de la presente investigación fue evaluar el efecto de dos Factores de Crecimiento (FC): Factor de Crecimiento Epidermal (EGF) y Factor de Crecimiento Similar a la Insulina Tipo I (IGF-I) sobre la tasa de maduración de ovocitos de alpaca y evaluar la influencia de ésta sobre la tasa de desarrollo embrionario luego de la Fecundación In Vitro (FIV), además de determinar el tipo y concentración de FC con la que se obtiene la mayor cantidad de embriones. La investigación se ejecutó en el Laboratorio de Biotecnología Reproductiva de la Estación Experimental Agraria Canaán - INIA Ayacucho. Se recuperaron un total de 2369 ovocitos de 414 ovarios de alpaca provenientes del Matadero Municipal de Huancavelica, los cuales fueron transportados a 4-9°C por un máximo de 20 h en solución salina al 0,9% con gentamicina. Para la recuperación de los Complejos Cúmulo-Ovocitos (CCO) se utilizó la técnica de disección-ruptura folicular, seleccionando los ovocitos de calidad I, II y III. Los ovocitos seleccionados fueron distribuidos al azar en un medio de maduración constituido por: TCM-199, piruvato de sodio (0,011 g/ml), 17-β estradiol (22,2 mg/ml), L-glutamina (0,015 g/ml), FSH (0,5 mg/ml), LH (0,5 mg/ml), SFB (5%), gentamicina (80 mg/ml) y suplementado con FC según tratamiento. Se diseñaron cinco tratamientos: T1: 10 ng/ml de IGF-I; T2: 50 ng/ml de IGF-I; T3: 10 ng/ml de EGF; T4: 50 ng/ml de EGF y T5: sin FC. Posteriormente el 30% de ovocitos sometidos a maduración in vitro fueron removidos de cada uno de los tratamientos para ser fijados en solución de metanol y ácido acético (3:1) a 4°C por 36 h y evaluados mediante la tinción de orceína acética (2%) para determinar la maduración nuclear a un aumento de 400X. El 70% de ovocitos sometidos a maduración se fecundaron con espermatozoides recuperados de epidídimos y los presuntos cigotos fueron cultivados en medio SOF durante 7 días a 38.5ºC con CO2 (5%), O2 (5%), N2 (5%) y 90% de humedad relativa. Los resultados indican que hay diferencia significativa (P<0,05) de los FC sobre la tasa de maduración de ovocitos con la prueba de Duncan; resultando el T1 (61,81%) diferente al T5 (42,22%). Respecto a la tasa de desarrollo embrionario, también se encontró diferencia significativa (P<0,05) entre tratamientos, siendo el IGF-I a 50ng/ml (37,26%) el tratamiento que proporcionó mayores tasas de desarrollo embrionario respecto a los demás tratamientos. En conclusión, la suplementación del medio de maduración con IGF-I a 50 ng/ml favorece la producción in vitro de mayor cantidad de embriones de alpaca.
Description
Keywords
Vicugna pacos, Maduración, Ovocitos, Desarrollo embrionario, Biotecnología reproductiva, Factor de crecimiento
