Efecto de la vitrificación sobre la viabilidad y maduración de ovocitos bovinos criollos. Ayacucho 2750 m.s.n.m. - 2018
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Date
2019
Authors
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Publisher
Universidad Nacional de San Cristóbal de Huamanga
Abstract
El presente estudio tuvo como objetivo observar el efecto de la vitrificación sobre la viabilidad y maduración de ovocitos bovinos criollos procedentes del matadero. Los vacunos criollos fueron seleccionados por fenotipo antes del faenado. Los ovarios fueron transportados en solución salina fisiológica (0.9%) a temperatura de 25-35ºC, el diámetro folicular considerado fue de 2-7 mm, y la aspiración se hizo con una jeringa de 10 ml, aguja N° 18 G los ovocitos se recibieron en solución de manipulación suplementada con 3% de suero fetal bovino. Los ovocitos recuperados fueron seleccionados por el número de capas de los cúmulos y la homogeneidad del citoplasma. Sólo los ovocitos de calidad excelente y buena fueron criopreservados con la técnica de vitrificación. Esta técnica consistió en someter los ovocitos a dos soluciones: 1) Solución de equilibrio (TCM-199+ HEPES; 7.5% etilenglicol, 7.5% dimetilsulfoxido (DMSO), 20% suero fetal bovino (SFB), 50 µg/ml gentamicina); y 2) Solución vitrificante (TCM-199 + hepes; 15% de etilenglicol, 15% DMSO, 0.5M sucrosa, 20% SFB, 50 µg/ml gentamicina), luego los ovocitos fueron puestos en dispositivos criotops (3 a 5 ovocitos/dispositivo) y sumergidos inmediatamente en nitrógeno líquido. Después de 24 hr los ovocitos fueron sometidos a dos soluciones desvitrificantes: 1) TCM199+HEPES+1M de sucrosa (1min, 37°C), y 2) TCM-199+hepes+0.5M de sucrosa (3min a 37°C). Inmediatamente fueron evaluados según dos criterios: el primero con tinción azul de tripán (0.05%) y el segundo mediante la maduración in vitro (MIV). Los resultados de vitalidad según la tinción muestran diferencias (p < 0.05) entre grupo control (86.8%) y el vitrificado (60.9%). En cuanto a la viabilidad por MIV (maduración in vitro) el medio utilizado fue TCM-199 (9ml) + SFB (1ml) + piruvato (20µl) + FSH-LH (50µl) + glutamina (60µl) + EGF (10µl) + estradiol (10µl) + gentamicina (10µl), y se observó un 89.0% para el grupo control y un 58.8% para el grupo de vitrificados (p < 0.05). En base a los datos obtenidos se concluye que las vitrificaciones de ovocitos bovinos pueden ser sometidos a criopreservación por la técnica de vitrificación y posterior a esta técnica llegar a la maduración, siendo una alternativa a considerar para futuras investigaciones de criopreservación de ovocitos.
Description
Keywords
Ovocitos, Bovinos criollos, Vitrificación, Maduración in vitro, Mejoramiento genético, Crioconservación
