Browsing by Author "Contreras Huamaní, Mijail"
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Item Efecto de la digestión enzimática y medios de cultivo en la viabilidad, rendimiento y proliferación de fibroblastos obtenidos por biopsia de oreja de Vicugna pacos “alpaca”(Universidad Nacional de San Cristóbal de Huamanga, 2025) Prado Yupanqui, Jhon Wacnerson; Mujica Lengua, Fidel Rodolfo; Contreras Huamaní, Mijail; Guillén Palomino, Crissthel YverlinLos fibroblastos son esenciales para la reparación tisular y los modelos in vitro de medicina regenerativa. Sin embargo, los protocolos optimizados para su aislamiento y expansión en Camélidos Sudamericanos (CSA) siguen siendo limitados. El objetivo fue evaluar el efecto de la digestión enzimática y los medios de cultivo sobre la viabilidad, el rendimiento y la proliferación de fibroblastos obtenidos de biopsias de oreja de alpaca. Las biopsias se procesaron utilizando colagenasa (3 mg/mL) sola o en combinación con hialuronidasa (1 mg/mL), seguido de cultivo en TCM-199 y DMEM. La viabilidad celular se evaluó mediante tinción con azul tripán y Hoechst/PI, mientras que la proliferación y el tiempo de duplicación se determinaron en condiciones de cultivo estándar. Los resultados mostraron que la combinación de colagenasa e hialuronidasa no mejoró el número de células aisladas y se asoció con un aumento de la apoptosis en comparación con la colagenasa sola. El medio de cultivo tuvo una mayor influencia que el tratamiento enzimático: los fibroblastos expandidos en DMEM mostraron tasas de proliferación significativamente mayores (p < 0,001) y tiempos de duplicación más cortos en comparación con los del TCM-199. Estos hallazgos indican que la digestión con colagenasa a 3 mg/mL es suficiente para el aislamiento eficaz de fibroblastos del tejido de la oreja de alpaca, mientras que el DMEM proporciona condiciones superiores para la expansión celular. Este trabajo establece las bases metodológicas para el cultivo de fibroblastos en alpaca, con posibles aplicaciones en medicina regenerativa veterinaria y biotecnología.Item Efecto de la suplementación de dos agentes capacitantes en el medio de fertilización para la producción in vitro de embriones en alpacas (Vicugna pacos) a 2750 msnm - Ayacucho 2017(Universidad Nacional de San Cristóbal de Huamanga, 2019) Palomino Guerrera, Walter; Olaguivel Flores, César Augusto; Contreras Huamaní, MijailEl presente trabajo de investigación se desarrolló con el objetivo de evaluar el efecto de dos agentes capacitantes en el medio de fertilización para la producción in vitro de embriones en alpacas (Vicugna pacos). Los ovarios se obtuvieron del matadero municipal de Pilpichaca (Huancavelica) y fueron transportados en SSF al 0.9%, más gentamicina a una temperatura de 37°C. De los 227 ovarios recolectados se recuperaron 1132 ovocitos viables, con una media de recuperación de 5.00 ± 0.42 ovocitos viables/ovario. Los ovocitos seleccionados fueron de calidad I, II y III, luego puestos a maduración en medio TCM-199 por 34 a 36h. Los ovocitos maduros se distribuyeron de forma aleatoria en cuatro tratamientos de medio de fertilización suplementados con heparina al 2% y PHE (2mM de Penicilamina, 1mM de Hipotaurina y 250mM de epinefrina), según la siguiente distribución: T1=Control; T2=Heparina; T3=PHE; T4=PHE+Heparina, y se colocó 2ul de solución de espermatozoides procedentes del epidídimo, que fueron seleccionados y capacitados por el método percoll (90%:45%) y luego puestos a cultivar por 18 horas. Después los presuntos cigotos se transfirieron al medio SOF y puestas a incubadora durante 7 días. El porcentaje de clivaje obtenidos a 24h post-cultivo del T1, T2, T3 y T4 fueron 16.53 ± 1.33, 19.92 ± 0.94, 21.42 ± 1.49 y 23.90 ± 2.71% respectivamente (P<0.05). El porcentaje de mórulas obtenidos a los 7 días según los T1, T2, T3 y T4 fueron de 24.23 ± 1.71, 29.49 ± 1.69, 35.00 ± 2.96 y 35.30 ± 2.64% respectivamente (P<0.05), el porcentaje de blastocistos obtenidos según los T1, T2, T3 y T4 fueron de 3.60 ± 0.67, 3.25 ± 0.82, 4.52 ± 0.99 y 6.34 ± 0.85% respectivamente (P˃0.05), y el porcentaje de embriones según los T1, T2, T3 y T4 fueron de 28.34 ± 1.66, 32.74 ± 1.02, 39.51 ± 2.98 y 41.64 ± 3.14% respectivamente (P<0.05), obteniendo mayor porcentaje de embriones en el tratamiento T4 y T3. El porcentaje de calidad de embriones de excelente, buena, mediana y mala fueron en T1: 15.66, 8.91, 3.27 y 0.50%; T2: 19.19, 12.25, 0.91 y 0.45%; T3: 28.73, 8.94, 0.33 y 1.51%; T4: 29.26, 7.22, 1.61 y 1.94% respectivamente. Se concluye que es importante la suplementación de agentes capacitantes como PHE más heparina en el medio de fertilización, para aumentar la tasa de producción in vitro de embriones de excelente calidad.Item Maduración nuclear e integridad del ADN espermático de “alpaca” en semen fresco y congelado. INIA - Ayacucho, 2019(Universidad Nacional de San Cristóbal de Huamanga, 2024) Orellana Berrocal, Harumi Rebeca; Mujica Lengua, Fidel Rodolfo; Contreras Huamaní, Mijail; Guillén Palomino, Crissthel YverlinEl empleo de semen congelado de alpaca en biotecnologías reproductivas como Inseminación Artificial (IA) o Fertilización In Vitro (FIV), requiere de evaluaciones previas, como la maduración nuclear e integridad del ADN espermático, ya que la criopreservación tiene un impacto negativo al generarse especies reactivas de oxígeno (ROS) que impiden una protaminación completa del ADN espermático, generando su fragmentación. La investigación se realizó en las instalaciones del Laboratorio de Biotecnología Reproductiva Animal de la Estación Experimental Agraria Canaán, INIA - Ayacucho. Se trabajó con 8 alpacas macho, cuyas muestras de semen fueron colectadas por el método de la vagina artificial acoplada a un maniquí. Se analizaron parámetros macroscópicos como volumen, color, y filancia, así como parámetros microscópicos como concentración, viabilidad, movilidad e integridad de membrana. La maduración nuclear se evaluó por tinción con azul de anilina y la integridad del ADN espermático mediante la prueba de dispersión de la cromatina espermática (SCD). Se encontró un porcentaje mayor al 95% de maduración nuclear espermática, tanto en semen fresco y congelado. Por otro lado, la integridad del ADN espermático fue variada, encontrándose diferencia significativa entre las medias porcentuales de semen fresco y congelado en algunos casos, pero no en todos. Se concluye que la criopreservación no afectó la maduración nuclear, pero sí la integridad del ADN espermático. Se recomienda ampliar el estudio utilizando métodos más precisos y con enfoque proteómico.
